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dc.contributor.advisorMoreira, Renato de Azevedo-
dc.contributor.authorFelix, Wagner Pereira-
dc.date.accessioned2016-08-02T14:44:01Z-
dc.date.available2016-08-02T14:44:01Z-
dc.date.issued2008-
dc.identifier.citationFELIX, W. P. (2008)pt_BR
dc.identifier.urihttp://www.repositorio.ufc.br/handle/riufc/18810-
dc.descriptionFELIX, Wagner Pereira. Produção heteróloga de frutalina em Pichia pastoris. 2008. 113 f. Tese (Doutorado em bioquímica)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2008.pt_BR
dc.description.abstractFrutalin, the Artocarpus incise alfa-D-galactose binding seed lectin was expressed and processed in a heterologous system for protein expression, using the metilotrophic yeast Pichia pastoris. In order to obtain the proposed objectives, three strategies were followed: identify the frutalin gene from the genomic DNA, obtained from the leaves; obtain, from the GenScript Corporation, the synthetic frutalin polypeptide chains gene, optimized for expression in Pichia system; and isolate frutalin gene, from mRNA present in fresh seeds in order to obtain the cDNA, using the RT-PCR technique. The obtained genes were inserted in the Pichia genome, in order to evaluate the lectin expression. While in the first strategy only the beta chain gene was obtained, in the other two the complete frutalin gene was obtained. The best results were obtained from the third strategy. The expression process was temperature dependent, with the optimum at 18 οC and the recombinant frutalin showed an apparent molecular mass of 17 kDa, which suggest the presence of both the linker peptide and the histidine tag.pt_BR
dc.language.isopt_BRpt_BR
dc.subjectBioquímicapt_BR
dc.subjectFrutalinapt_BR
dc.subjectLectina recombinantept_BR
dc.subjectPichia pastorispt_BR
dc.subjectFrutalinpt_BR
dc.subjectRecombinant lectinpt_BR
dc.titleProdução heteróloga de frutalina em Pichia pastorispt_BR
dc.typeTesept_BR
dc.contributor.co-advisorGrangeiro, Thalles Barbosa-
dc.description.abstract-ptbrA frutalina, lectina α-D-galactose ligante, foi expressa e processada num sistema heterólogo para expressão de proteínas utilizando a levedura metilotrófica Pichia pastoris. Para atingir os objetivos esperados foram desenvolvidas três estratégias: identificar o gene que codifica para a frutalina a partir do DNA genômico obtido de folhas de A. incisa; sintetizar, por uma empresa especializada, o gene que codifica para as cadeias polipeptídicas da frutalina, otimizando-o para a expressão em P. pastoris e isolar o gene que codifica para a frutalina, a partir do mRNA presente em sementes maduras e frescas, para obtenção do cDNA utilizando a técnica da RT-PCR. Enquanto na primeira estratégia, foi obtido apenas o gen da cadeia beta, nas duas outras estratégias o gen completo foi obtido. No entretanto, a estratégia que mostrou melhor expressão da frutalina recombinante em P. pastoris foi a da obtenção do gene que codifica para a frutalina, a partir do mRNA. A expresão foi tempertura dependente e a frutalina recombinante apresentou uma massa molecular aparente de 17 kDa, sugerindo a presença do peptídeo de ligação e da cauda de histidina.pt_BR
dc.title.enProduction heterologous of frutalin in Pichia pastorispt_BR
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