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Title in Portuguese: Efeitos renais promovidos por polissacarídeos sulfatados da alga marinha Gracilaria cornea
Title: Renal effects promoted by sulfated polysaccharides from seaweed Gracilaria cornea
Author: Norões, Terentia Batista Sá de
Advisor(s): Monteiro, Helena Serra Azul
Keywords: Gracilaria
Polissacarídeos
Perfusão
Apoptose
Issue Date: 2014
Citation: NORÕES, Terentia Batista Sá de. Efeitos renais promovidos por polissacarídeos sulfatados da alga marinha Gracilaria cornea. 2014. 90 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2014.
Abstract in Portuguese: As algas marinhas são um grupo de seres vivos aquáticos com capacidade de produzir polissacarídeos sulfatados. Esses polissacarídeos são encontrados em grandes concentrações nas algas da espécie Gracilaria cornea e possuem diversas finalidades comerciais, sendo utilizados nos principais setores industriais. Possuem também relevância científica por apresentarem diversas atividades biológicas. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a citotoxicidade renal dos polissacarídeos sulfatados totais (PSTs) da alga marinha Gracilaria cornea. Primeiramente, estudaram-se os efeitos dos PSTs, em três concentrações (1μg/mL, 3μg/mL e 4,5μg/mL), no sistema de perfusão de rim de rato isolado com a finalidade de avaliar as possíveis alterações dos parâmetros renais. Neste modelo experimental foram utilizados ratos Wistar machos (280-300 g). Após a perfusão renal, os rins foram submetidos à análise histológica. Os parâmetros avaliados foram analisados pela ANOVA e Student t-test, com p<0,05. Investigaram-se os efeitos causados pelos PSTs em cultura de células tubulares renais do tipo MDCK (Madin-Darby canine kidney). Essas células foram cultivadas em garrafas plásticas a 37 °C em atmosfera de 5% de CO2, com meio RPMI 1640 suplementado com soro bovino fetal a 10%. Para avaliar o tipo de morte celular causada pelos PSTs em cultura de células MDCK, foram realizados ensaios com anexina V-FITC e iodeto de propídio, marcadores de apoptose e necrose, respectivamente, no citômetro de fluxo com a concentração de 50 µg/mL dos PSTs. Os resultados encontrados demonstraram que os PSTs promoveram aumento significativo na pressão de perfusão (PP) e na resistência vascular renal (RVR) nas concentrações de 3,0 e 4,5 µg/mL. O fluxo urinário (FU) diminuiu com a concentração de 1 µg/mL dos PSTs, porém sofreu aumento nas demais concentrações. O ritmo de filtração glomerular (RFG) diminuiu significativamente nas três concentrações. Foi observada diminuição do percentual de transporte dos eletrólitos cloreto, sódio e potássio. O Clearance Osmótico (COSM) foi diminuído e aumentado com as concentrações de 1,0 e 4,5 μg/mL, respectivamente. As alterações histológicas nos rins indicaram alterações tubular e glomerular. O tratamento de cultura de células com os PSTs causou redução da viabilidade celular em todas as concentrações estudadas (200, 100, 50, 25, 12,5, 6,25 e 3,12 µg/mL) não sendo concentração-dependente. Observou-se morte celular significativa, com evidências de um processo apoptótico, além de morte celular por apoptose tardia. Esses achados tentam colaborar para um melhor conhecimento acerca dos efeitos citotóxicos renais dessa alga e pode ainda propiciar a descoberta de novas ferramentas farmacológicas antitumorais.
Abstract: The red marine algae are a group of sea live beings able to produce sulfated polysaccharides. These polysaccharides are found in great amount in algae of Gracilaria cornea species and they also have several commercial uses, mainly in industrial fields. They are also used for scientific pourposes because of its biologic activities. This work`s goal is to evaluate the effects of sulfated polysaccharides total (SPTs) from the seaweed Gracilaria cornea contributing to a better understanding about its effects. First, we have studied SPTs effects in three concentrations (1μg/mL, 3μg/mL e 4,5μg/mL), in the renal perfusion system aiming to evaluate the possible changes in kidney parameters. In this experimental model we used male Wistar rats (280-300 g). After the perfusion, the kidneys were subjects of histological analysis. The parameters were analised using ANOVA and Student t-test (p<0,005). The results we have found proved that SPTs promoted a significant increase in perfusion pressure (PP) and in renal vascular resistance (RVR) in concentrations 3,0 and 4,5 µg/mL. The urinary flow (UF) decreased with the 1 µg/mL SPTs concentration, but increased with the 3,0 and 4,5 µg/mL concentrations. The glomerular filtration rate (GFR) significantly dicreased with all the three concentrations. We noticed a decrease in sodium, potassium and chloride transport. The Osmotic Clearance (COSM) decreased with 1,0 μg/mL concentration and increased with 4,5 μg/mL concentration. The histological changes were mild and included tubular and glomerular damages. We also investigated the side effects caused by SPTs in cultured renal tubular cells of the type MDCK (Madin-Darby canine kidney). MDCK cells were grown in plastic flasks at 37 °C in umidified atmosphere of 5% CO2 – air with RPMI 1640 medium supplemented with 10% fetal calf serum. The SPTs caused decrease in cell viability in all studied concentrations (200, 100, 50, 25, 12,5, 6,25 and 3,12 µg/mL) and this effect did not depend on concentration. To evaluate the type of cell death caused by SPTs in MDCK cells, we performed anexin V-FITC and propidium iodide assays, respectively apoptosis and necrosis indicators. This analysis was made in a flow cytometry system with a 50 µg/mL SPTs concentration. We found a significant cell death amount, with apoptotic signs, and also late apoptotic cell death. These findings can improve the understanding about this algae biologic activities and help to find new farmacologic antitumoral weapons.
URI: http://www.repositorio.ufc.br/handle/riufc/11457
metadata.dc.type: Tese
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