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Título: Efeito do FSH, Ativina-A e GDF-9 sobre o desenvolvimento in vitro de folículos pré-antrais caprinos
Título em inglês: Effect of FSH, activin-A and GDF-9 on the development in vitro of caprine preantral follicles
Autor(es): Leitão, Cíntia Camurça Fernandes
Orientador(es): Silva, José Roberto Viana
Palavras-chave: Hormônio Folículo Estimulante
Fator 9 de Diferenciação de Crescimento
RNA Mensageiro
Engenharia Genética
Data do documento: 2011
Citação: LEITÃO, C. C. F. (2011)
Resumo: O objetivo deste estudo foi investigar os níveis de RNA mensageiro (RNAm) para ativina-A em folículos pré-antrais e antrais caprinos e os efeitos do hormônio folículo estimulante (FSH), ativina-A e fator de crescimento e diferenciação - 9 (GDF-9) sobre o crescimento e a expressão de RNAm para ativina-A, GDF-9, proteína morfogenética óssea (BMP) -2, -4, -6, -7, -15 e receptor de FSH (R-FSH) em folículos pré-antrais caprinos cultivados in vitro. Inicialmente, folículos primordiais, primários e secundários, bem como complexos cumulus-oócito (COCs) e células da granulosa mural/teca de pequenos e grandes folículos antrais foram isoladas mecanicamente a partir de ovários de cabra e a expressão de RNAm para ativina-A foi avaliada por PCR em tempo real. Para os estudos in vitro, folículos secundários caprinos foram isolados e cultivados por 6 dias na presença de FSH sozinho (50 ng/mL) ou em combinação com ativina-A (100 ng/mL) ou GDF-9 (200 ng/mL). Isoladamente ou em combinação com FSH, a influência de ativina-A na expressão de ativina-A e R-FSH, e o efeito do GDF-9 sobre os níveis de RNAm para GDF-9, R-FSH e BMP -2, -4 , -6, -7 e -15 em folículos secundários após 6 dias de cultivo foram testados. Para isso, após a extração do RNA total e síntese do cDNA, os níveis de RNAm para ativina-A, GDF-9, R-FSH e BMP -2, -4, -6, -7 e -15 foram quantificados por PCR em tempo real. Os resultados mostraram que folículos secundários apresentavam níveis menores de RNAm para ativina-A comparado aos folículos primários (p<0,05). Não houve diferença nos níveis de RNAm para ativina-A entre folículos primordial e primário ou secundário (p>0,05). Aliado a isso, não houve diferença entre COCs de pequenos e grandes folículos antrais (p>0,05). Além disso, as células da granulosa e da teca de grandes folículos antrais apresentaram maiores níveis de RNAm para ativina-A do que de pequenos folículos antrais (p<0,05). Quando comparamos a expressão do RNAm para ativina-A entre COCs de pequenos e grandes folículos antrais e suas células da granulosa e da teca, nenhuma diferença nos níveis de expressão foi observada (p>0,05). Após o cultivo in vitro de folículos secundários, a presença de FSH sozinho ou associado com ativina-A ou GDF-9 aumentou a sobrevivência, crescimento folicular e formação de antro (p<0,05). O FSH também aumentou o RNAm para ativina-A, enquanto os folículos cultivados com ativina-A apresentaram níveis aumentados de RNAm para R-FSH (p<0,05). Além disso, o GDF-9 diminuiu a expressão de RNAm para BMP -2 e -15 (p<0,05), mas não teve efeito sobre a expressão de BMP -4, -6 e -7 (p>0,05). Em conclusão, durante a transição de folículo primário para secundário há uma diminuição do RNAm para ativina-A, enquanto ocorre um aumento da expressão deste fator durante o crescimento de folículos antrais. FSH, ativina-A e GDF-9 estimulam o crescimento de folículos secundários caprinos após 6 dias de cultivo. Após cultivo folicular, FSH controla a expressão de ativina-A e a expressão do R-FSH é regulada por ativina-A. Ainda, GDF-9 reduz a expressão do RNAm para BMP -2 e -15
Abstract: The aim of this study was to investigate the levels of messenger RNA (mRNA) for activin-A on goat preantral and antral follicles and the effects of follicle stimulating hormone (FSH), activin-A and growth and differentiation factor - 9 (GDF-9) on growth and mRNA expression for activin-A, GDF-9, bone morphogenetic protein (BMP) -2, -4, -6, -7, -15 and FSH receptor (FSH-R) in goat preantral follicles cultured in vitro. Initially, primordial, primary and secondary follicles, as well as cumulus-oocyte complexes (COCs) and mural granulosa/theca cells of small and large antral follicles were isolated mechanically from goat ovaries and the expression of mRNA for activin-A was evaluated by real-time PCR. For in vitro studies, goat secondary follicles were isolated and cultured for 6 days in the presence of FSH alone (50 ng/mL) or in combination with activin-A (100 ng/mL) or GDF-9 (200 ng/mL). Alone or in combination with FSH, the influence of activin-A on expression of activin-A and FSH-R, and the effect of GDF-9 on the levels of mRNA for GDF-9, FSH-R and BMP -2, -4, -6, -7 and -15 in secondary follicles after 6 days of culture were tested. For this, after extraction of total RNA and cDNA synthesis, the levels of mRNA for activin-A, GDF-9, FSH-R and BMP -2, -4, -6, -7 and -15 were quantified by real time PCR. The results showed that secondary follicles had lower levels of mRNA for activin-A, than compared to primary follicles (p<0.05). There was no difference in levels of mRNA for activin-A between primordial and primary or secondary (p>0.05). Allied to this, there was no difference between COCs of small and large antral follicles (p>0.05). Moreover, granulosa and theca cells of large antral follicles showed higher levels of mRNA for activin-A than in small antral follicles (p<0.05). When comparing mRNA expression for activin-A between COCs from small and large antral follicles and their granulosa and theca cells, no difference in expression levels was observed (p>0.05). After in vitro culture of secondary follicles, the presence of FSH either alone or associated with activin-A or GDF-9 increased survival, follicular growth and antrum formation (p<0.05). The FSH increased mRNA for activin-A, while the follicles cultured with activin-A showed increased levels of mRNA for FSH-R (p<0.05). In addition, GDF-9 decreased mRNA expression for BMP -2 and -15 (p<0.05), but had no effect on expression of BMP -4, -6, and -7 (p>0.05). In conclusion, during the transition from primary to secondary follicles there is a reduction of mRNA for activin-A, whereas there is an increased expression of this factor during the growth of antral follicles. FSH, activin-A and GDF-9 stimulate growth of goat secondary follicles after 6-day culture. After follicle culture FSH controls the expression of activin-A, and the expression of FSH-R is regulated by activin-A. Furthermore, GDF-9 reduces the mRNA expression for BMP-2 and -15
Descrição: Leitão, C. C. F. Efeito do FSH, Ativina-A e GDF-9 sobre o desenvolvimento in vitro de folículos pré-antrais caprinos. 2011. 112 f. Dissertação (Mestrado em Biotecnologia), Campus de Sobral, Universidade Federal do Ceará, Sobral, 2011.
URI: http://www.repositorio.ufc.br/handle/riufc/17713
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