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Título: Fungos isolados de sirênios e cetáceos no brasil: uma abordagem fenotípica, genotípica, diagnóstica e de virulência
Título em inglês: Fungi isolated from Sirenia and cetaceans in Brazil: a phenotypic approach, genotypic, diagnostic and virulence
Autor(es): Carvalho, Vitor Luz
Orientador(es): Rocha , Marcos Fábio Gadelha
Palavras-chave: Mamíferos
Leveduras
Microbiota
Tipagem Molecular
Data do documento: 30-Jul-2015
Citação: CARVALHO, V. L. ; ROCHA, M. F. G. (2015)
Resumo: O objetivo desse trabalho foi isolar fungos de sirênios e cetáceos no Brasil, visando investigar aspectos fenotípicos, genotípicos, diagnósticos e de virulência. Para tanto, foi coletado‚ com swabs estéreis‚ material da cavidade oral‚ narina/espiráculo‚ abertura genital e/ou reto de 104 animais, incluindo 50 peixes-bois-da-Amazônia (Trichechus inunguis), 33 peixes-bois-marinho (T. manatus), 13 botos-vermelhos (Inia geoffrensis), três cachalotes-anão (Kogia sima), dois golfinhos-cabeça-de-melão (Peponocephala electra)‚ um cachalote-pigmeu (K. breviceps)‚ um cachalote (Physeter macrocephalus) e uma baleia-jubarte (Megaptera novaeangliae). Dentre estes animais, um peixe-boi-da-Amazônia e oito peixes-boi-marinho apresentaram lesões suspeitas de micose cutânea, sendo realizados raspados de pele. Os swabs foram semeados em placas contendo ágar Sabouraud com cloranfenicol‚ mantidas a 37ºC por cinco dias, enquanto as escamas de pele foram semeadas em tubos contendo ágar Sabouraud com cloranfenicol a 25ºC por dez dias. As leveduras isoladas foram identificadas através de provas bioquímicas, micromorfologia, sistema automatizado Vitek, PCR, RFLP e/ou sequenciamento, enquanto os fungos filamentosos foram identificados pela macro e micromorfologia. As cepas de Candida spp. (n=114) obtidas foram submetidas ao teste de microdiluição em caldo para avaliação do perfil de sensibilidade aos antifúngicos itraconazol‚ fluconazol e anfotericina B e aos testes de produção de fatores de virulência (fosfolipases, proteases e biofilme). Leveduras da espécie C. albicans foram submetidas à tipagem molecular por MLST. Foram diagnosticados dois casos de micoses superficiais cutâneas em sirênios, sendo uma levedurose mista por C. tropicalis e Trichosporon asahii e um caso de feohifomicose por Bipolaris hawaiiensis, bem como um surto de fusariose (Fusarium sp.). Foram isoladas 155 cepas‚ sendo 112 de T. inunguis (40 Candida albicans‚ 14 C. parapsilosis sensu stricto‚ 3 C. metapsilosis, 4 C. orthopsilosis, 9 C. guilliermondii‚ 3 C. pelliculosa‚ 2 C. tropicalis‚ 2 C. glabrata‚ 1 C. famata‚ 1 C. krusei‚ 1 C. norvegensis‚ 1 C. ciferri‚ 22 Trichosporon sp.‚ 6 T.asahii, 2 Rhodotorula sp., 1 Cryptococcus laurentii), 29 de T. manatus (12 C. albicans‚ 4 C. tropicalis‚4 C. famata‚ 3 C. guilliermondii‚ 1 C. krusei‚ 1 Rhodotorula sp.‚ 2 R. mucilaginosa, 1 R. minuta, 1 Trichosporon sp.) e 14 de cetáceos (6 C. tropicalis, 2 C. parapsilosis, 2 C. famata, 1 Candida sp., 3 Cryptococcus sp.). As concentrações inibitórias mínimas (CIMs) para anfotericina B variaram de 0‚03 a 1µg/mL‚ não sendo observadas cepas resistentes. As CIMs de itraconazol e fluconazol variaram de 0‚03 a 16 µg/ml e de 0‚125 a 64 µg/ml‚ respectivamente‚ sendo constatada resistência a pelo menos uma droga em 34‚2% dos isolados, com destaque para C. albicans e C. tropicalis. Quanto aos fatores de virulência testados, 50% produziram fosfolipases, com elevada frequência em C. albicans; 50% produziram proteases, com maior prevalência em C. albicans e C. tropicalis; e 35% produziram biofilme em escalas variáveis, com maior prevalência em C. tropicalis e C. orthopsilosis. A tipagem molecular foi realizada com 45 cepas de C. albicans, obtendo-se genótipos pertencentes a seis clados dentre os 18 existentes para a espécie, variando de acordo com o hospedeiro e localização geográfica. Baseado no exposto, esse estudo representa uma contribuição sistemática e multidisciplinar acerca da micologia de mamíferos aquáticos.
Abstract: The aim of this study was to isolate Sirenia fungi and cetaceans in Brazil to investigate phenotypic aspects, genotypic, diagnostics and virulence. Thus, it was collected with sterile swabs, oral cavity material, nostril / blowhole, genital opening and / or rectum of 104 animals, including 50-manatees of-Amazon (inunguis Trichechus), 33 manatees Navy ( T. manatus), 13 porpoises-red (Inia geoffrensis), three dwarf sperm whales (Kogia sima), two dolphins head-to-melon (Peponocephala electra) a pygmy sperm whale (K. breviceps), a sperm whale (Physeter macrocephalus) and a humpback whale (Megaptera novaeangliae). Among these animals, one Amazonian manatee eight manatees navy had suspected ringworm skin lesions, performed skin scrapings. The swabs were plated onto Sabouraud agar plates containing chloramphenicol, maintained at 37 ° C for five days, while skin scales were seeded in tubes containing Sabouraud agar with chloramphenicol at 25 ° C for ten days. The yeasts were identified by biochemical tests, micromorphology, automated system Vitek, PCR, RFLP and / or sequencing as filamentous fungi were identified by the macro and micromorphology. The strains of Candida spp. (N = 114) obtained were subjected to the broth microdilution test for evaluation of the sensitivity profile to antifungals itraconazole, fluconazole and amphotericin B and the test production of virulence factors (phospholipases, proteases and biofilm). Yeast C. albicans species were submitted to molecular typing by MLST. Two cases of skin surface mycoses in sirenians been diagnosed, a mixed levedurose by C. tropicalis and Trichosporon asahii and a case phaeohyphomycosis by Bipolaris hawaiiensis, and an outbreak of Fusarium (Fusarium sp.). 155 strains were isolated, and 112 inunguis T. (40 Candida albicans, 14 C. parapsilosis strictly speaking, 3 C. metapsilosis, 4 C. orthopsilosis, 9 C. guilliermondii, C. pelliculosa 3, 2 C. tropicalis, 2 C . glabrata, C. famata, 1, 1 C. krusei, C. norvegensis 1, C 1 Ciferri, 22 Trichosporon sp., 6 T.asahii, 2 Rhodotorula sp., Cryptococcus laurentii 1) T. manatus 29 (12 C. albicans, C. tropicalis,4 4 C. famata, C. guilliermondii 3, 1 C. krusei, 1 Rhodotorula sp., 2 R. mucilaginosa, R 1 minute, 1 Trichosporon sp.) and 14 cetaceans (6 C. tropicalis, C. parapsilosis 2, 2 C. famata, 1 Candida sp., 3 Cryptococcus sp.). The minimum inhibitory concentrations (MICs) to amphotericin B ranged from 0.03 to 1μg / ml, resistant strains were observed. The MICs of itraconazole and fluconazole ranged from 0.03 to 16 g / ml and 0.125 to 64 mg / ml, respectively, and found resistance to at least one drug in 34.2% of the isolates, especially C. albicans and C. tropicalis. As for the virulence factors tested, 50% phospholipases produced with high frequency in C. albicans; 50% produced proteases, with a higher prevalence in C. albicans and C. tropicalis; and 35% produced biofilm in varying scales, with higher prevalence in C. tropicalis, and C. orthopsilosis. Molecular typing was performed with 45 strains of C. albicans, yielding genotypes from six clades among the 18 species existing for varying according to the host and geographic location. Based on the above, this study represents a systematic, multidisciplinary contribution about mycology aquatic mammals.
Descrição: CARVALHO, V. L. Fungos isolados de sirênios e cetáceos no brasil: uma abordagem fenotípica, genotípica, diagnóstica e de virulência. 2015. 129 f. Tese (Doutorado em Microbiologia Médica) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015.
URI: http://www.repositorio.ufc.br/handle/riufc/19920
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