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Título: Efeito protetor da interleucina- 4 na cistite hemorrágica induzida por ifosfamida em camundongos
Título em inglês: Protective effect of interleukin- 4 upon ifosfamide-induced hemorrhagic cystitis in mice
Autor(es): Macêdo, Francisco Yuri Bulção de
Orientador(es): Ribeiro , Ronaldo de Albuquerque
Palavras-chave: Ifosfamida
Ciclofosfamida
Data do documento: 2010
Citação: MACÊDO, F. Y. B. (2010)
Resumo: A cistite hemorrágica (CH) é um efeito indesejado limitante do uso clínico dos agentes quimioterápicos do grupo das oxazafosforinas, principalmente ciclofosfamida (CFS) e ifosfamida (IFS). Isto se deve à formação de acroleína como subproduto do metabolismo dessas drogas. A partir de prévios trabalhos conduzidos no Laboratório de Farmacologia da Inflamação e do Câncer da Universidade Federal do Ceará, sabe-se que o óxido nítrico (NO) através da ativação de iNOS, o fator de ativação plaquetária, citocinas, como o TNF-α e IL-1β, e prostaglandinas, pela ativação da enzima ciclooxigenase-2 (COX-2), são mediadores chave envolvidos nos eventos inflamatórios da CH, evidenciados pelo dano urotelial, edema e hemorragia. Sabendo-se que interleucina- 4 (IL- 4) é uma citocina antiinflamatória capaz de prevenir a produção de TNF-α, IL-1β e de atenuar a expressão de enzimas inflamatórias como iNOS e COX-2, foi investigado se IL- 4 é capaz de reduzir as alterações inflamatórias vistas na CH induzida por IFS. Para tanto, camundongos Swiss (25-30 g; n=6 por grupo) foram tratados com salina ou IFS (400 mg/kg, ip), e foram analisados por alterações no peso úmido vesical (PUV), mudanças macroscópicas e microscópicas, além da quantificação de edema e hemoglobina vesical. Em outros grupos experimentais, IL- 4 (0,4; 2 ou 10 ng) foi administrada ip uma hora antes à administração de IFS. Em outro experimento, camundongos C57BL/6 selvagens e C57BL/6 nocaute para o gene da IL- 4 (-/-) foram tratados com IFS e analisados quanto a mudanças no PUV. Imunohistoquímica para IL-1β e TNF-α, bem como identificação de proteínas pela técnica de Western blot para iNOS e COX-2 foram conduzidos nos animais tratados com IL- 4. Também avaliou-se a administração de soro anti-IL- 4 (50 µl/animal, ip) em animais selvagens meia hora antes IFS. Nos animais tratados com IL- 4 (2 e 10 ng), o PUV foi significativamente reduzido em 27% e 39% respectivamente quando comparados ao grupo tratado apenas com IFS. O extravasamento vascular foi reduzido em 29% e 24% e a hemorragia em 47% e 61% nos animais tratados com IL- 4 (2 e 10 ng respectivamente para ambos). A administração de IL- 4 exógena também atenuou a expressão de TNF-α, IL-1β significativamente, e a expressão de iNOS em 27% (dose de 10 ng) e COX-2 em 80% e 76% (doses de 2 e 10 ng, respectivamente), sendo ambos resultados significantes estatisticamente. Em adição, animais nocaute para IL- 4 (-/-) e camundongos tratados com soro anti-IL- 4 exibiram um grau de CH pior quando comparados aos camundongos tratados com IFS apenas, em torno de 44% e 28% respectivamente. IL- 4, uma citocina antiinflamatória, pode reduzir os fenômenos inflamatórios vistos na CH induzida por IFS.
Abstract: Hemorrhagic cystitis (HC) is a limiting side effect from the clinic use of chemotherapy agents, mainly cyclophosphamide (CYP) and ifosfamide (IFS). This is due to the fact that acrolein is a urinary metabolite of CYP and IFS, which has been demonstrated to be the causative agent of hemorrhagic cystitis (HC) induced by these compounds. Based on previous experimental studies, most of them from the Laboratory of Pharmacology of Inflammation and Cancer of Federal University of Ceará, it was demonstrated the participation of inflammatory cytokines such as TNF-α, IL-1β, and the expression of iNOS and COX-2 in ifosfamide-induced HC. Thus, knowing that interleukin-4 (IL- 4) is an anti-inflammatory cytokine able to prevent the production of TNF-α, IL-1β, and decrease the expression of inflammatory enzymes such as iNOS and COX-2, we investigated whether IL- 4 is capable of reducing inflammatory changes seen with ifosfamide-induced HC. For this, male Swiss mice (25-30 g; 6 per group) were treated with saline or ifosfamide (400 mg/kg, intraperitoneally (ip) and analyzed by changes in bladder wet weight (BWW), macroscopic and microscopic parameters, exudate, and hemoglobin quantification. In other groups, IL- 4 (0,4; 2 or 10 ng) was administered ip 1h before ifosfamide administration. In other experimental groups, C57BL/6 WT (wild type) and C57BL/6 WT IL- 4 (-/-) knockout animals were treated with ifosfamide and analyzed for changes in BWW. Immunohistochemistry to TNF-α and IL-1β as well as protein identification by Western blot assay for iNOS and COX-2 were carried out on ifosfamide and IL- 4 treated animals. In other experimental groups, anti-IL- 4 serum was given (50 µL/animal, ip) 30 min before ifosfamide. In IL- 4 treated animals, BWW change was significantly less in animals treated with ifosfamide administration only, being reduced by 27% and 39% (2 and 10 ng respectively). Vascular permeability was reduced by 29% and 24%, and hemorrhage by 47% and 61% in those animals treated with IL- 4 (2 and 10 ng respectively). Exogenous IL- 4 also attenuated TNF-α, IL-1 β, iNOS and COX-2 expression on ifosfamide treated bladders. Moreover, knockout animals for IL- 4 (-/-) and animals treated with anti-IL- 4 serum exhibit a more severe degree of inflammation when compared to the wild type mice (approximately 44% and 28% respectively). IL- 4, an anti-inflammatory cytokine, can attenuate the inflammation seen with ifosfamide-induced hemorrhagic cystitis.
Descrição: MACEDO, Francisco Yuri Bulcão de. Efeito protetor da interleucina-4 (IL-4) na cistite hemorrágica induzida por ifosfamida em camundungos. 2010. 110 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2010.
URI: http://www.repositorio.ufc.br/handle/riufc/2351
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