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Título: Padronização de modelo experimental de artrite na articulação temporomandibular induzida por zymozan em ratos e estudo do papel do óxido nítrico
Título em inglês: Experimental model of temporomandibular joint arthritis induced by zymozan in rats and the study of the role of nitric oxide
Autor(es): Chaves, Hellíada Vasconcelos
Orientador(es): Brito , Gerly Anne de Castro
Palavras-chave: Articulação Temporomandibular
Artrite Experimental
Óxido Nítrico
Data do documento: 2006
Citação: CHAVES, H. V. (2006)
Resumo: Disfunção temporomandibular (DTM) é um distúrbio relacionado à função do sistema mastigatório que acomete as articulações temporomandibulares (ATM), os músculos mastigatórios e/ou estruturas associadas. As desordens inflamatórias na ATM classificam-se como uma das quatro classes de DTM, estando presente em um grande número de pacientes. Embora a inflamação e a dor nas estruturas articulares sejam entidades clínicas importantes, seus mecanismos são pouco compreendidos. Objetivamos montar modelo experimental de artrite na ATM para estudar a fisiopatologia da doença e a participação de mediadores inflamatórios como óxido nítrico (NO). Foram utilizados ratos Wistar fêmeas (160-220 g) nos quais se injetou 40 microlitros de zymosan (Zy: 0,25; 0,5; 1 ou 2 mg) na ATM esquerda dos animais para indução de artrite. Esses animais foram sacrificados nos tempos de 3 h, 6 h, 1, 2, 3, 5, 7, 10 e 21 dias. Utilizaram-se inibidores da síntese de óxido nítrico L-NAME (10, 30 e 100 mg/kg i.p.) ou 1400W (0,5 e 1 mg/kg s.c.) os quais foram injetados 30 min antes da indução da artrite. Parâmetros de contagem do influxo celular no líquido sinovial, estudo da permeabilidade vascular pelo extravasamento de azul de Evans, estudo do ensaio de mieloperoxidase (MPO), determinação da produção de óxido nítrico através da dosagem de nitrito pelo método de Griess, análise histopatológica e imunohistoquímica para NO sintase induzida (NOSi) foram avaliados. Observamos que Zy (2 mg) induziu aumento significativo do influxo celular no líquido sinovial (p<0,05), do extravasamento de azul de Evans (p<0,05), da atividade de mieloperoxidase (p<0,05) e da dosagem de nitrito/nitrato (p<0,05) na 6ª h após indução da artrite em relação ao grupo controle. A análise histopatológica mostrou que Zy (2 mg) induziu, de forma significativa, infiltrado celular na membrana sinovial, no tecido conjuntivo periarticular, no tecido muscular esquelético e espessamento da MS na 6ª h após indução da artrite. No 10º d após indução da artrite, continua a apresentar infiltrado celular na MS, no tecido conjuntivo periarticular, no tecido muscular esquelético e espessamento da MS, assim como passa a apresentar fibrose da MS e do disco articular. No 21º dia após indução da artrite, foram observados infiltrado celular apenas na MS, com espessamento da mesma, e aumento da fibrose da membrana sinovial, da cartilagem articular, do tecido periarticular e do disco articular, significativamente diferentes em relação ao grupo controle. À análise da reação de imunohistoquímica para NOSi, observou-se aumento da expressão de NOSi no animais com Zy (2 mg). Tanto L-NAME 100 mg/kg quanto 1400W 1 mg/kg (p<0,05) foram capazes de reverter o aumento do influxo celular no líquido sinovial da ATM (p<0,05), o extravasamento plasmático (p<0,05), as alterações histopatológicas e a expressão de NOSi pelo estudo da reação de imunohistoquímica para NOSi observadas na 6ª h após indução da artrite. Esses resultados sugerem que o modelo experimental proposto se presta ao estudo da artrite na ATM, e que NO participa na fisiopatologia do processo inflamatório da DTM.
Abstract: Temproromandibular disfunction (TMD) is related to a masticatory system disfunction which can include the temporomandibular joint (TMJ), the masticatory muscles and/or other related structures. TMJ inflammatory disorders are one of the major pathology of TMD afecting a great number of patients. Although TMJ´s inflammation and pain are important cinical entities, their mechanisms are poorly understood. The purpose of the study is to propose an experimetnal model of TMJ´s arthritis to study its patophysiological mechanisms and inflammatory mediators such as nitric oxide (NO). Female Wistar rats (160-220 g) were used to the study. To induct TMJ´s arthritis, zymosan 40 microL (Zy: 0,25; 0,5; 1 ou 2 mg) was injected into left TMJ. The animals were sacrified in times 3 h, 6 h, 1, 2, 3, 5, 7, 10 e 21 days. Nitric oxide syntase inhibitors L-NAME (10, 30 e 100 mg/kg i.p.) or 1400W (0,5 e 1 mg/kg s.c.) were administered 30 min before TMJ´s arthritis induction. Leucocyte influx count in the sinovial fluid, vascular permability study using Evans blue dye extravasation, myeloperoxidase assay (MPO), NO production determination using Griess reaction, histopatological analyisis and imunohystochemical for induced NO synthase (iNOS) were utilized as parameters of this sutudy. It was observed that Zy (2 mg) induced significantly increase in leucocyte influx count (p<0,05), Evans blue dye´s extravasation (p<0,05), myeloperoxidase activity (p<0,05) and NO dosage (p<0,05) compared with control group 6 h after TMJ arthritis induction. Histopatological analysis of TMJ of Zy injected animals showed inflammatory cell infiltration in synovial membrane (SM), in conective periarticular tissue, in squeletic muscle tissue and thickness of SM in 6 h after TMJ arthritis. On the 10th day after TMJ arthritis, the TMJ remain showing leucocyte infiltration to synovial membrane (SM), to conective periarticular tissue, to squeletic muscle tissue and thickness of SM, as well as fibrosis of SM and articular disc. On the 21st d after TMJ arthritis, it was observed cell influx only to SM, showing, however, thickness of SM and the major fibrosis of SM, articular cartilage, conective periarticular tissue and articular disc. TMJ´s imunohistochemistry reaction for iNOS showed increase iNOS´s expression in animals with TMJ´s arthritis compared to the control group. L-NAME 100 mg/kg and 1400W 1 mg/kg reduced the increase in leucocyte count in the synovial fluid, the Evans blue dye extravasation, the histopatological alterations, and reduced the iNOS expression after imunohistochemistry reaction for iNOS 6 h after TMJ arthritis. These results sugest that this experimental model can be used to study TMJ arthritis, and that NO can participate in the physiopathological mechanisms of TMD.
Descrição: CHAVES, Hellíada Vasconcelos. Padronização de modelo experimental de artrite na articulação temporomandibular induzida por zymozan em ratos e estudo do papel do óxido nítrico. 2006. 124 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2006.
URI: http://www.repositorio.ufc.br/handle/riufc/2402
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