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Título: Envolvimento da pentraxina 3 (PTX3) na patogênese da cistite hemorrágica induzida por ifosfamida em camundongos
Título em inglês: Involvement of pentraxin 3 (PTX3) in the patogenesis of hemorrhagic cystitis induced by iphosphamide in mice
Autor(es): Gifoni, Markus Andret Cavalcante
Orientador(es): Ribeiro , Ronaldo de Albuquerque
Coorientador(es): Dias, Adriana Abalen Martins
Palavras-chave: Inflamação
Ifosfamida Ifosfamida
Cistite
Data do documento: 2008
Citação: GIFONI, M. A. C. (2008)
Resumo: A cistite hemorrágica (CH) é um fenômeno inflamatório frequentemente associado à quimioterapia com oxazafosforinas. Trata-se de uma resposta inflamatória inata à ação da Acroleína (ACR), metabólito hepático comum à Ifosfamida (IFO) e à ciclofosfamida (CTX). O papel da resposta ao recrutamento de receptores toll-like (TLR) e do estímulo por TNF-α e IL-1β com envolvimentto de iNOS e COX-2 tem sido demonstrado neste fenômeno. Estudos recentes demonstram que a Pentraxina 3 (PTX3) assume papel de mediador inflamatório em modelos de resposta inflamatória inata in vivo, sobretudo relacionada ao recrutamento de TLR. Desta forma, o presente estudo pretende investigar o possível envolvimento de PTX3 na patogênese da CH induzida por ifosfamida em camundongos. Para isso, foi realizada quantificação de RNAm por RT-PCR para PTX3 e IL-1β em camundongos C57/ BL6 tratados com ifosfamida e salina. Em seguida, o modelo experimental da CH induzida por ifosfamida foi reproduzido em grupos de camundongos com hiperexpressão e nocauteados para PTX3 em comparação com os respectivos controles do tipo selvagem e com grupos controle tratados com salina para posterior obtenção dos pesos vesicais úmidos (PVU), realização de análise histomorfométrica, imunohistoquímica e quantificação de RNAm por RT-PCR para PTX3, IL-1β, TNF-α e iNOS. Os animais transgênicos e seus controles foram sacrificados com tempos de 3h e 12h após o tratamento, enquanto os nocauteados e seus controles foram sacrificados com 12 horas do tratamento. Finalmente, a CH em animais C57/ BL6 foi modulada com o pré-tratamento com Talidomida, Pentoxifilina, MESNA, Amifostina e Aminoguanidina para a posterior marcação imunohistoquímica com PTX3, IL-1β, TNF-α e iNOS. Observou-se que o RNAm de PTX3 está cerca de 70 vezes mais expresso em animais com CH, contra uma razão de expressão de 10 para IL-1β. Animais trangênicos para PTX3 têm redução inicial da resposta inflamatória com expressão inferior de PTX3 e TNF-α e expressão aumentada de iNOS e intensificação da inflamação ao tempo de 12 horas, com expressão superior dos mediadores. Não houve diferenças significativas de intensidade da CH em animais KO em relação aos controles. A modulação da CH por talidomida e MESNA produziu redução importante sobre a expressão de PTX3, enquanto a inibição da CH por amifostina não teve redução expressiva da pentraxina. Em conjunto, estes dados apontam para um envolvimento inequívoco de PTX3 na fisiopatologia da inflamação inata em modelo de CH murino com íntima relação coma expressão de TNF-α.
Abstract: The Hemorrhagic Cystitis (HC) is an inflammatory reaction usually associated with Cancer Chemotherapy with Oxazaphosphorines. It is an innate inflammatory response to vesical irritation by Acrolein, an hepatic metabolite of the treatment with Iphosphamide and Cyclophosphamide. The role of toll-like receptor (TLR) engagement and TNF-α and IL-1β expression and the involvement of iNOS and COX-2 in the pathogenesis has been well demonstrated in a murine model of HC. Recent data configure pentraxin 3 (PTX3) as an inflammatory mediator in several experimental models of innate immune response in vivo, with a straight relation with TLR engagement. Because of that, this study looks at the involvement of PTX3 in the pathogenesis of iphosphamide–induced HC in mice. For this purpose, the mRNA to PTX3 and IL-1β t was quantified by RT-PCR in groups of C57BL6 mice treated with Iphosphamide or Saline. After that, groups of transgenic and Knock-Out mice to PTX3 and its respectives wild-type controls were treated with Iphosphamide or saline with intention to measure the Bladder Wet Weight (BWW), histomorphometric scores and Immunohistochemistry and RT-PCR to PTX3, IL-1β, TNF-α e iNOS analysis. The transgenic mice and its controls were killed in 3h and 12h after the treatment, while the PTX3 KO and its controls were killed after 12 hours. Finally, the experimental HC was modulated by pretreatment with Talidomide, Pentoxiphiline, MESNA, Amifostine and Aminoguanidine and the bladders submitted to immunohistochemistry assay (PTX3, TNF-α, IL-1β and iNOS). By RT-PCR quantification, mRNA for PTX3 was expressed 70 times more in mice treated with iphosphamide than in controls, while IL-1β RNAm had an expression rate of 10 times. PTX3 transgenic mice had initial reduction of the inflammatory response with less expression of PTX3 and TNF-α and greater expression of iNOS. In the other hand, after 12 hours, the PTX3 transgenic mice had more inflammatory signs with superior expression of all the mediators. There was no difference between the PTX3 KO mice and its controls in the HC intensity although differences between groups were seen in cytokines expression. Talidomide and MESNA produced substantial reduction on the PTX3 expression, the same was seen to TNF-α, while the amifostine marked inhibition of HC had low effect on PTX3 expression. These data as a whole, point to an unequivocal involvement of PTX3 in the pathogenesis of innate inflammatory response of HC in mice with close relation with TNF-α engagement.
Descrição: GIFONI, Markus Andret Cavalcante. Envolvimento da pentraxina 3 (PTX3) na patogênese da cistite hemorrágica induzida por ifosfamida em camundongos. 130 f. 2008. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2008.
URI: http://www.repositorio.ufc.br/handle/riufc/2592
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