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Title in Portuguese: Avaliação da microbiota de dentes decíduos necrosados utilizando a reação da polimerase em cadeia
Author: Sousa, Rebecca Bastos Rocha Araújo
Advisor(s): Moreira Neto, José Jeová Siebra
Keywords: Microbiota
Endodontia
Issue Date: 30-Jan-2014
Citation: SOUSA, R. B. R. A. Avaliação da microbiota de dentes decíduos necrosados utilizando a reação da polimerase em cadeia. 2014. 71 f. Tese (Doutorado em Odontologia) - Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Universidade Federal Do Ceará, Fortaleza, 2014.
Abstract in Portuguese: Este estudo tem por objetivo avaliar a microbiota de dentes decíduos necrosados através da técnica da Reação em cadeia da polimerase (PCR), considerando as infecções endodônticas primárias de dentes decíduos, comparando a microbiota dos necrosados por cárie e traumatismos dentários. Este trabalho também avaliou a viabilidade bacteriana em três meios de transporte (Fluido Reduzido para Transporte, Tris- EDTA e Viability Medium Göteborg Anaerobically III), simulando as condições de transporte da microbiota endodôntica da clínica ao laboratório, considerando o tempo decorrido entre a coleta e o processamento. Participaram deste estudo clínico 43 crianças, de dois a nove anos de idade, que buscaram atendimento na Clínica de Odontopediatria da Universidade Federal do Ceará por apresentarem necrose em dentes decíduos. Foram incluídos 47 canais necrosados de pacientes normossistênicos com no mínimo de dois terços de raíz, possíveis de serem restaurados. Foram excluídos pacientes que estavam fazendo uso de antibiótico terapia ou aqueles que o fizeram nos últimos três meses, previamente ao início da pesquisa, e os que apresentavam comportamento inadequado para a realização da pesquisa. Para a coleta microbiológica, após a anestesia infiltrativa e isolamento absoluto, foi realizada a desinfecção do campo operatório para abertura da cavidade coronária. A coleta foi feita a partir da introdução de três cones de papel absorvente no canal mais amplo, por um minuto cada um. O armazenamento e transporte, destes microrganismos coletados, foram realizados utilizando o VMGA III, selecionado a partir de um experimento laboratorial. Neste experimento avaliou-se a viabilidade de uma cepa de Porphiromonas gingivalis, armazenadas em Flúido Reduzido para transporte (RTF), TE e Viability Medium Göteborg Anaerobically, VMGA III. Em um laboratório, sob condições de anaerobiose, foram inoculados em eppendorffs® por períodos de uma hora, duas e quatro horas. Em seguida, inoculadas em placas de Petri nestes diferentes tempos, com Fastidious Anaerobe Agar (FAA), enriquecidas. Passada 72 horas foi realizada a contagem das colônias bacterianas. Esta avaliação demonstrou que o VMGAIII foi o meio de transporte que permitiu um armazenamento superior a quatro horas, das Porphiromonas gingivalis para processamento em cultura, quando comparado com o RTF e o TE. Assim, as coletas microbiológicas foram introduzidas em eppendorffs® com VMGA III para posterior processamento das amostras. Das amostras foram extraídos o DNA bacteriano para posterior realização da técnica da reação em cadeia da polimerase (PCR) seguida da eletrofores, através da qual se identificaram a presença das seguintes bactérias: Fusobacterium nucleatum, Parvimona micra, Porphyromonas endodontalis, Porphyromonas gingivalis, Dislister pneumonsites, Filifactor alocis, Treponema denticola, Tanerella forsythia, Enterococcus faecalis, Streptococcus mitis, Streptococcus mutans, Streptococcus sanguis, Prevotela nigrescens, Actinomyces naeslundi e o Enterococcus faecalis. Foi então identificada uma microbiota composta de microrganismos, predominantemente, anaeróbios negativos ao teste de Gram. Os mais frequentes foram: Prevotella nigrescens (17,92%), Parvimona micra (16,24%) e Actinomyces naeslundi (12,88%). O menos frequentes foram: Filifactor alocis (1,12%), Streptococcus mitis (1,12%), Enterococcus faecalis (0,56%) e Streptococcus mutans (0,56%). Considerando a causa da necrose pulpar, a cárie associou-se à Parvimona micra (p=0,036) e, ao trauma, o Streptococcus mitis (0,022). Desta forma conclui-se, a partir de coletas clínicas de dentes decíduos necrosados, que a metodologia envolvida no processo de coleta e armazenamento bacteriano, como o meio de transporte, pode influenciar em nossos achados. A amostra teve uma maior frequência de bactérias 9 anaeróbias, negativas ao teste de Gram. A causa da necrose pode influenciar na constituição da microbiota, onde a cárie associa-se a bactérias anaeróbias positivas e negativas ao teste de Gram, como Parvimona micra e Treponema denticola, e associam-se ao trauma as bactérias facultativas e positivas ao teste de Gram, como a Tanarella forsythia, Streptococcus sanguis e Streptococcus mitis.
Abstract: This study aims to evaluate the microbiota of necrotic primary teeth through the technique of polymerase chain reaction (PCR), whereas primary endodontic infections, comparing the microbiota of necrotic caries and dental trauma. This study also evaluated the bacterial viability in three transport medias (Reduced to Fluid Transport , Tris - EDTA and Viability Medium Göteborg anaerobically III), simulating the conditions of carriage of the endodontic microbiota from the clinic to the laboratory, considering the time elapsed between the collection and processing. This clinical study involved 43 children from two to nine years of age, who sought care at the Pediatric Dentistry Clinic of Federal University of Ceará. They might present necrosis in primary teeth. Healthy patients formed a sample with 47 necrotic channels. Were included teeth with at least two-thirds of root and able to be restored. Patients who were making use of antibiotic therapy or those who did the last three months before the start of the study, and those with inappropriate behavior for the research were excluded. For microbiological collection after infiltration anesthesia and absolute isolation, disinfection of the operative field to open the coronary cavity was performed. The collection was made from the introduction of three absorbent paper cones in the wider channel for one minute each. The storage and transport of these listed microorganisms were performed using the VMGA III selected from a laboratory experiment. In this experiment we evaluated the feasibility of a strain of Porphiromonas gingivalis , stored in fluid Reduced to transport (RTF), TE and Viability Medium Göteborg anaerobically, VMGA III. In a laboratory under anaerobic conditions, were inoculated in eppendorffs® for periods of one hour, two and four hours. Then inoculated in Petri dishes in these different times, with Fastidious Anaerobe Agar (FAA) enriched. Last 72 hours counting of bacterial colonies was performed. This evaluation showed that the VMGAIII was the means of transportation that allowed an upper storage to four hours of processing Porphiromonas gingivalis in culture when compared with the RTF and the TE. Thus, microbiological samples were introduced in eppendorffs® with VMGA III for further processing of the samples. DNA of bacterial samples for subsequent implementation of the technique of polymerase chain reaction (PCR) followed by eletrofores, through which was extracted identified the presence of the following bacteria: Fusobacterium nucleatum, Parvimona microns, Porphyromonas endodontalis, Porphyromonas gingivalis, Dislister pneumonsites, alocis Filifactor, Treponema denticola, Tannerella forsythia, Enterococcus faecalis, Streptococcus mitis, Streptococcus mutans, Streptococcus sanguis, Prevotela nigrescens, Actinomyces naeslundi and Enterococcus faecalis. Then identify a microbial organisms comprising predominantly anaerobic Gram negative for the test. The most common were: Prevotella nigrescens (17.92%), Parvimona micra (16.24%) and Actinomyces naeslundi (12.88 %). The less frequent were Filifactor alocis (1.12 %), Streptococcus mitis (1.12%), Enterococcus faecalis (0.56 %) and Streptococcus mutans (0.56 %). Whereas the cause of pulp necrosis, caries was associated with Parvimona micra (p = 0.036), and trauma, Streptococcus mitis (0.022). Thus it is concluded from clinical samples of necrotic primary teeth, the methodology involved in the bacterial collection and storage process as the means of transport, can influence our findings. The sample had a higher frequency of the Gram negative anaerobic bacteria test. The cause of necrosis may influence the establishment of the microbiota, where the decay is associated with positive and negative anaerobic bacteria to the Gram test, as Parvimona micra and Treponema denticola, and were associated with the trauma and positive facultative bacteria to the Gram test such as forsythia Tanarella, Streptococcus mitis and Streptococcus sanguis.
URI: http://www.repositorio.ufc.br/handle/riufc/26942
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