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Title in Portuguese: Purificação e caracterização parcial de um potyvirus isolado de siratro e produção de anti-soro específico
Author: Marques, Mary Anne Lopes
Advisor(s): Lima, José Albersio de Araújo
Keywords: Fitotecnia
Issue Date: 1992
Citation: MARQUES, Mary Anne Lopes. Purificação e caracterização parcial de um potyvirus isolado de siratro e produção de anti-soro específico. 1992. 64 f. Dissertação (Mestrado em Agronomia - Fitotecnia) - Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 1992.
Abstract in Portuguese: A partir de plantas de siratro, Macroptilium atropurpureum, naturalmente infetadas no campo experimental de forrageiras do Departamento de Zootecnia da Universidade Federal do Ceará, isolou-se um vírus com o qual foram realizados estudos visando a sua identificação e caracterização. Estudos citológicos ao microscópio ótico revelaram a presença de inclusões citoplasmáticas típicas dos potyvirus, induzidas pelo vírus em estudo, o qual foi denominado de vírus do mosaico do siratro ("siratro mosaic virus", SrMV). Testes de dupla difusão em agar revelaram relacionamento sorológico entre o SrMV e o vírus do mosaico do caupi "blackeye", o vírus do mosaico da clitória, o vírus do endurecimento dos frutos do maracujazeiro e isolados do vírus do mosaico do caupi transmitido por pulgão. Por outro lado, o SrMV mostrou-se sorologicamente distinto do vírus do mosaico comum do feijoeiro e do vírus da mancha anelar do mamoeiro. Dentre as 23 espécies vegetais incluídas nos estudos de gama de hospedeiras, o SrMV foi capaz de infetar sete, sendo cinco delas pertencentes à família Leguminosae. Entre as espécies vegetais infetadas destacou-se Nicotiana benthamiana, como hospedeira adequada para propagação e purificação do vírus. Extrato vegetal contendo o vírus foi clarificado com uma combinação de clorofórmio e tetracloreto de carbono, na etapa inicial do processo de purificação, seguida pela precipitação do vírus com polietilenoglicol combinado com triton X-100. 0 vírus precipitado e concentrado foi finalmente separado dos constituintes celulares do hospedeiro por centrifugação em gradiente de cloreto de césio, seguido de um ciclo de centrifugações diferenciais, com uma ultracentrifugação final de 85.000g por 90 min. O rendimento final obtido na purificação do SrMV, foi de 19,00 mg de vírus por Kg de tecido infetado. A análise eletroforética da preparação purificada do vírus, revelou um componente protéico principal de peso molecular igual a 36 k e uma proteína menor com um peso molecular igual a 29 k de ocorrência devida, provavelmente, à degradação enzimática da proteína capsidial, durante o processo de purificação e estocagem do vírus. O SrMV foi eficientemente transmitido pelo pulgão Aphis craccivora, de forma não persistente. A transmissibilidade do vírus por sementes não foi constatada. O anti-soro obtido para o SrMV apresentou um título de 1:16 em dupla difusão em agar, alta especificidade e bom nível de pureza, o que o torna adequado ao uso em testes sorológicos de dupla difusão em agar.
Abstract: A virus isolated from naturally infected plants of siratro, Macroptilium atropurpureum, grown on the Animal Science Department of the Federal University of Ceará was partially characterized according to its biological, serological and physical properties, and the cytopathological aspects of infected host. The cytopathological studies under the light microscope of infected cells indicated the presence of cytoplasmic inclusions similar to those described for the potyviruses. The virus was designated as siratro mosaic virus (SrMV). Serological tests showed that the SrMV is serologically related to blackeye cowpea mosaic virus, clitoria mosaic virus, passionfruit woodiness virus and isolates of cowpea aphid-borne mosaic virus, and serologically different from bean common mosaic and papaya ringspot viruses. The virus was able to infect systematically seven among 23 plant species studied, five of which belong to the family Leguminosae. Nicotiana benthamiana was selected for propagation and purification of the virus. In the purification procedure, a combination of chloroform and carbon tetrachloride was used in the clarification process, followed by precipitation with polyethylene glycol combined with iriton X-100. The virus was further separated from the plant cell constituents by an isopycnic centrifugation in cesium chloride. Yelds of ac. 19,00 mg of virus was obtained per Kg of infected tissue. Polyacrilamide gel electrophoresis with sodium dodecyl sulfate of purified virus preparation revealed the presence of a main component protein with molecular weight of 36 kDa and a smaller protein component of 29 k, probably due to an enzymatic degradation of the capsidial protein during the process of purification and storage of the virus. The SrMV was transmitted efficiently by Aphis craccivora, in a non-persistent manner. The virus was not transmitted by 738 seeds from infected siratro plants. The obtained antiserum showed a titer of 1:16 for the virus, and a degree of specificity and a level of purify adequated to be used in double immune diffusion tests.
URI: http://www.repositorio.ufc.br/handle/riufc/42598
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