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Title in Portuguese: Estudo da expressão dos genes TP53, VEGFA e HIF1α em pacientes com Síndrome Mielodisplásica, Citopenia Idiopática de Significado Indeterminado e Citopenias não Neoplásicas: associação com citocinas e fatores de prognóstico
Author: Santos, Talyta Ellen de Jesus dos
Advisor(s): Lemes, Romélia Pinheiro Gonçalves
Keywords: Inibidores da Angiogênese
Inflamação
Genes p53
Issue Date: 20-Mar-2019
Citation: SANTOS, T. E. D. S. Estudo da expressão dos genes TP53, VEGFA e HIF1α em pacientes com Síndrome Mielodisplásica, Citopenia Idiopática de Significado Indeterminado e Citopenias não Neoplásicas: associação com citocinas e fatores de prognóstico. 2019. 102 f. Tese (Doutorado em Ciências Farmacêuticas) - Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2019.
Abstract in Portuguese: A Síndrome Mielodisplásica (SMD) é um conjunto de doenças complexas em que o diagnóstico pode ser desafiador, principalmente em pacientes que não preenchem os critérios para SMD, porém apresentam citopenias inexplicadas. A expressão de genes envolvidos em neoplasias e a presença de substâncias no microambiente medular podem ser relevantes no estudo dessas condições, visto que interagem diretamente com as células saudáveis e neoplásicas da medula. O objetivo do estudo foi avaliar a expressão dos genes TP53 , HIF1 α e VEGFA e os níveis de citocinas VEGFA, IL 6, TNFα e IFN ᵧ em pacientes com SMD, Citopenia Idiopá tica de Significado Indeterminado ( ICUS ), Citopenia Clonal de Significado Indeterminado ( CCUS ) e Citopenias de Causa não N eoplásica (CNN), associando os resultados a fatores clínicos, laboratoriais e de prognóstico. Inicialmente, foram incluídos 85 pacientes. Destes, 13 foram excluídos após confirmação de outros diagnósticos, ficando um total de 72 participantes, dos quais: SMD (n=34), ICUS (n=31) e CNN (n =7). Amostras de medula foram colhidas em EDTA para extração do material genético e obtenção do plasma. A expressão dos genes de interesse foi realizada através da reação em cadeia da enzima polimerase (PCR) em tempo real, através do sistema TaqMan ®. A qu antificação dos marcadores VEGFA, IL 6, TNFα e IFN ᵧ foi feita por enzimaimunoensaio (ELISA), de acordo com as intruções do fabricante. Dados epidemiológicos, clínicos e laboratoriais foram retirados dos prontuários. A análise estatística foi realizada com auxílio do programa GraphPadPrism5.0 e SPSS 24.1 As comparações entre as médias dos grupos foram realizadas pelos testes t Student ou Mann Whitney ou pela análise de variância (ANOVA), dependendo do número de grupos. A curva de sobrevida livre de eventos f oi realizada pela curva de Kaplan Meier , através do programa Cutt off finder . Foram considerados significantes valores de p <0,05. A média de idade dos pacientes com SMD, ICUS/CCUS e CNN foi respectivamente 74, 61 e 50. Os parâmetros do hemograma foram seme lhantes nos três grupos, excetuando se a contagem de monócitos que fo i maior no grupo com SMD (p<0.0 5). Quanto às citocinas, os níveis de IFN ᵧ foram semelhantes entre os grupos SMD e ICUS/CCUS e diminuídos quando comparados ao grupo CNN (p=0.017). O mesmo foi observado em relação à expressão do gene HIF1 α, onde o grupo CNN apresentou maior expressão em relação aos demais (p=0.019). Quando analisados de acordo com as citopenias, a expressão do mRNA VEGFA foi maior no grupo com níveis de hemoglobina entre 8 10 g/dL (p= 0.038). Em relação às plaquetas, os níveis de TNFα foram superiores naqueles com contagem menor que 50 .000/mm³ (p= 0.01). Os pacientes com fibrose medular apresentaram níveis maiores de TNFα (p= e de IL 6 (p=0.001). Ao estratificar os paci entes com SMD em formas iniciais e avançadas da doença, observou se uma maior concentração de IFN ᵧ (p= no primeiro grupo. Entretanto, para a citocina TNFα foram obtidas maiores concentrações no grupo em estágio mais avançado (p= 0.045). Não foram obse rvadas associações entre a expressão dos genes e as citocinas analisadas e o número de blastos e a citogenética. Os parâmetros avaliados não influenciaram a sobrevida dos pacientes no período do estudo. Os resultados do estudo permitiram concluir que a cit ocina IFN ᵧ e o gene HIF1 α estão mais expressos nas citopenias de origem não clonal ; que os níveis de TNFα e IL 6 foram associados à fibrose. Os resultados sugeriram ainda que os genes HIF1 α , VEGFA e TP53 atuam através de mecanismos em conjunto, tendo em vista as correlações obtidas. Novos estudos nessa linha de pesquisa serão úteis na elucidação dos mecanismos envolvidos nesses processos dessas diferentes condições
Abstract: Myelodysplastic Syndrome (MDS) is a complex set of diseases in which the diagnosis can be challenging, especially in patients who do not meet the criteria for MDS, but have unexplained cytopenias. The expression of genes involved in n eoplasias and the presence of substances in the medullary microenvironment may be relevant in the study of these conditions, since they interact directly with the healthy and neoplastic ce lls of the marrow. The aim of the study was to evaluate the expressi on of the TP53, HIF1 α and VEGFA genes and the cytokine levels VEGFA, IL 6, TNFα and IFN ᵧ in patients with MDS, Idiopathic Cytopenia of Indeterminate Significance (ICUS), Clonal Cytopenia of Undete rmined Significance (CCUS) and N on Neoplastic Cytopenias (C NN), associating the results with clinical, laboratory and prognostic factors. Initiall y, 85 patients were included. From these, 13 were excluded after confirming other diagnoses, remaining 72 participants: MDS (n = 34), ICUS (n = 31) and CNN (n = 7). Bone marrow samples were collected in EDTA to extract the genetic material and obtain the plasma. Gene e xpression was performed through the polymerase chain reac tion (PCR) in real time, with TaqMan ® system. Quantification of VEGF A, IL 6, TNFα and IFN ᵧ was performed by enzyme immunoassay (ELISA), according to the manufacturer's instructions. Epidemiological, clinical and laboratory data were taken from medical records. Statistical analysis was performed using GraphPadPrism5.0 and S PSS 24.1. The comparisons between the means of the groups were performed using Student's t test or Mann Whitney test or analysis of variance (ANOVA), depending on the n umber of groups. The overall survival curve was performed by the Kaplan Meier curve, thr ough the Cutt off finder program. Values of p <0.05 were considered significant. The mean age of patients with MDS, ICUS / CCUS and CNN was 74, 61 and 50, respectively. Blood count parameters were similar in the three groups, except for the monocyte coun t that was h igher in the MD S group (p <0.05 ). As for cytokines, IFN levels were similar between the SMD and ICUS / CCUS groups and decreased when compared to the CNN group (p = 0.017). The same was observed in relation to the expression of the HIF1 α gene, where the CNN group presented greater expression in relation to the others (p = 0.019). When analyzed according to cytopenias, VEGFA mRNA expression was higher in the group with h emoglobin levels between 8 10 g / dL (p= 0.038). Regarding platelets, TNFα lev els were higher in those with a count below 50,000 / mm³ (p= 0.01). Patients with medullary fibrosis presented higher levels of TNFα (p= and IL 6 (p= 0.001). In stratifying patients with MDS in early and advanced forms of the disease, a higher concentr ation of IFN ᵧ (p= was observed in the first group. However, for the cytokine TNFα, higher concentrations were obtained in the more advanced stage (p= 0.045). No associations were observed between the expression of the genes and the cytokines analyzed and the number of blasts and cytogenetics. The parameters evaluated did not influence the survival of patients in the study period. The results of the study allowed to conclude that the cytokine IFN ᵧ and the HIF1 α gene are more expressed in cyto penias of nonclonal origin and TNFα and IL 6 levels were associated with fibrosis. The results also suggested that the genes HIF1 α, VEGFA and TP53 act through mechanisms together, in view of the correlations obtained. New studies in this line of research will be us eful in elucidating the mechanisms involved in these processes of these different conditions.
URI: http://www.repositorio.ufc.br/handle/riufc/42603
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