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Title in Portuguese: Estudo transversal de proteômica salivar de crianças com Diabetes Mellitus Tipo 1
Author: Lima, Pedro Henrique Moreira
Advisor(s): Fonteles, Cristiane Sá Roriz
Keywords: Diabetes mellitus
Saliva
Proteômica
Issue Date: 30-Jan-2020
Citation: LIMA, P. H. M. Estudo transversal de proteômica salivar de crianças com Diabetes Mellitus Tipo 1. 2020. 8 f. Dissertação (Mestrado em Odontologia) - Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2020.
Abstract in Portuguese: O diabetes mellitus tipo 1 (DM1) é uma doença autoimune que leva à deficiência na produção de insulina, correspondendo à doença mais prevalente na infância, incidente em crianças menores de 5 anos de idade. A saliva tem se mostrado um fluido diagnóstico de doenças sistêmicas, embora ainda sejam escassos os estudos em saliva para identificação de proteínas biomarcadoras. Nessa perspectiva, a presente dissertação objetivou analisar perfil do proteoma salivar de crianças com e sem diabetes mellitus tipo 1 (compensadas e não- compensadas) e suas correlações com hemoglobina glicada (Hb A1c) e controle metabólico. Foram selecionadas 64 crianças de ambos os sexos, com idade entre 2-10 anos de idade, sendo 32 para compor os grupos compensados e descompensados (DM1-C e DM1-NC, respectivamente) e 32 controles (C) pareadas por idade e sexo. A coleta de dados ocorreu em momento único com anamnese e exames de monitoramento do diabetes (Glicemia em jejum, pós-prandial e Hb A1c), coleta de saliva, exame clinico odontológico, tratamento odontológico e posterior análise com protocolo laboratorial de mensuração de fluxo, dosagem de proteínas por método de Bradford, SDS-PAGE e espectrometria de massa para identificação de peptídeos e proteínas. Os dados foram tabulados no Excel e analisados utilizando SPSS, em seguida, usando testes paramétricos e não-paramétricos, adotou-se nível de significância de p≤0,05. Os resultados mostraram na população do estudo, crianças (30 meninas e 34 meninos) com idade média de 7,28 ± 1,87 anos, A Hb A1c média nos pacientes diabéticos foi de 7,91% ± 1,35% (min-máx. 6,1%-10,3%), sendo DM1-C (6,7% ± 0,34) e DM1-NC (9,1 ± 0,77). O fluxo salivar médio (mL/min) foi de 0,37 ± 0,2 (min-máx. 0,02 e 1,02), enquanto as concentrações salivares médias de proteínas foram de 4,23μg/μL ± 4,3 (min-máx. -1,48 e 15,71). As concentrações normalizadas de proteínas com base no fluxo salivar foram de 1,9 μg/μL ± 0,9 (min-máx. -0,99 e 14,14). Comparação entre diabéticos e controle não demonstrou haver diferença significativa entre os grupos para as variáveis: concentrações proteicas (p=0,41), idade (p=0,34), fluxo (p=0,49), concentração proteica normalizada com base no fluxo (p=0,07), peso (p=0,88), altura (p=0,36). Houve uma correlação positiva de significância da concentração de proteínas em saliva com a glicose pós-prandial (rho = 0,40; p= 0,048) e com a idade (rho=0,32; p=0,03). Observou-se uma presença total de 18 bandas proteicas, sem diferença significativa entre presença/ausência das bandas com presença/ausência de DM1 ou DM1-C/DM1-NC. 8 Proteínas foram identificadas: cystatin-B, lysozyme C, cystatin-SN, cystatin-S, cystatin-SA, pancreatic amylase B, alpha-amylase 1, immunoglobulin heavy constant alpha 1. Em conclusão, foram observadas associações e diferenças quantitativas e qualitativas entre a saliva total de pacientes com e sem DM1, no qual a presença de determinadas bandas de proteínas associadas ao sexo, amamentação e alergia podem auxiliar na identificação de determinadas proteínas e fontes biomarcadoras.
Abstract: Type 1 diabetes mellitus (DM1) is an autoimmune disease that leads to deficiency in insulin production, corresponding to the most prevalent disease in childhood, affecting children under 5 years of age. Saliva has been shown to be a diagnostic fluid for systemic diseases, although studies on saliva for the identification of biomarker proteins are still scarce. In this perspective, the present dissertation aimed to analyze the profile of the salivary proteome of children with and without type 1 diabetes mellitus (compensated and non-compensated) and their correlations with glycated hemoglobin (Hb A1c) and metabolic control. 64 children of both sexes, aged 2-10 years old, were selected, 32 of whom were included in the compensated and decompensated groups (DM1-C and DM1-NC, respectively) and 32 controls (C) matched for age and sex. Data collection occurred in a single moment with anamnesis and diabetes monitoring exams (fasting, postprandial glycemia and Hb A1c), saliva collection, dental clinic exam, dental treatment and subsequent analysis with laboratory flow measurement protocol, protein measurement using the Bradford method, SDS-PAGE and mass spectrometry to identify peptides and proteins. The data were tabulated in Excel and analyzed using SPSS, then, using parametric and non-parametric tests, a significance level of p≤0.05 was adopted. The results showed in the study population, children (30 girls and 34 boys) with a mean age of 7.28 ± 1.87 years, the mean Hb A1c in diabetic patients was 7.91% ± 1.35% (min- max 6.1% -10.3%), DM1-C (6.7% ± 0.34) and DM1-NC (9.1 ± 0.77). The mean salivary flow (mL / min) was 0.37 ± 0.2 (min-max. 0.02 and 1.02), while the mean salivary protein concentrations were 4.23 μg / μL ± 4.3 (min-max. -1.48 and 15.71). Normalized protein concentrations based on salivary flow were 1.9 μg / μL ± 0.9 (min-max. -0.99 and 14.14). Comparison between diabetics and control showed no significant difference between groups for the variables: protein concentrations (p = 0.41), age (p = 0.34), flow (p = 0.49), normalized protein concentration based on flow (p = 0.07), weight (p = 0.88), height (p = 0.36). There was a positive correlation of significance in the concentration of proteins in saliva with postprandial glucose (rho = 0.40; p = 0.048) and with age (rho = 0.32; p = 0.03). A total presence of 18 protein bands was observed, with no significant difference between the presence / absence of bands with the presence / absence of DM1 or DM1-C / DM1-NC. 8 Proteins were identified: cystatin-B, lysozyme C, cystatin-SN, cystatin-S, cystatin-SA, pancreatic amylase B, alpha-amylase 1, immunoglobulin heavy constant alpha 1. In conclusion, quantitative and qualitative associations and differences were observed between the total saliva of patients with and without DM1, in which the presence of certain bands of proteins associated with sex, breastfeeding and allergy can help in the identification of certain proteins and biomarker sources.
URI: http://www.repositorio.ufc.br/handle/riufc/51025
metadata.dc.type: Dissertação
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