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Title in Portuguese: Transcritos relacionados com a maturação oocitária em bovinos: expressão em oócitos de folículos pré-antrais e antrais e efeitos in vitro de EGF e progesterona.
Title: Transcripts related to oocyte maturation in cattle: expressions in oocytes of pre-antral and antral follicles and in vitro effects of EGF and progesterone.
Author: Bezerra, Francisco Taiã Gomes
Advisor(s): Silva, José Roberto Viana
Keywords: Crescimento de oócitos
Pré-maturação de oócitos
Maturação de oócitos
estoque de RNAm
Issue Date: 2020
Citation: BEZERRA, Francisco Taiã Gomes. Transcritos relacionados com a maturação oocitária em bovinos: expressão em oócitos de folículos pré-antrais e antrais e efeitos in vitro de EGF e progesterona. 2020. 166 f. Tese (Doutorado em Biotecnologia)-Universidade Federal do Ceará. Sobral. 2020.
Abstract in Portuguese: Durante o crescimento, sob influencia de hormônios e fatores de crescimento, como a Progesterona (P4) e o Fator de Crescimento Epidermal (EGF), os oócitos sintetizam grandes quantidades de RNAm que se acumulam para formar um grande estoque de RNAm materno, dentre esses, estão o fator de crescimento e diferenciação 9 (GDF9), a quinase cMOS, a ribonuclease específica poli (a) (PARN), o fator de iniciação da tradução (eIF4E), a ciclina B1 (CCNB1) e a histona com ligante específico para oócito (H1FOO). Dessa forma, os objetivos deste estudo foram: (1) avaliar os níveis de RNAm para eIF4E, PARN, H1FOO, cMOS, GDF9 e CCNB1 em oócitos de folículos secundários e antrais em diferentes estágios de desenvolvimento e (2) avaliar a influência de fator de crescimento epidermal (EGF) e progesterona (P4) no crescimento, retomada da meiose e nos níveis dos referidos transcritos em oócitos de folículos antrais pequenos e médios após pré-maturação e maturação in vitro. Para este fim, oócitos frescos derivados de folículos secundários bovinos, bem como de folículos antrais pequenos, médios e grandes foram coletados para análise dos níveis de RNAm para os transcritos citados acima. Além disso, oócitos de folículos secundários cultivados por 18 dias ou de complexos cumulus oócito (CCO) de folículos antrais após crescimento e pré-maturação também foram coletados para análise dos níveis de RNAm. Em seguida, CCOs derivados de folículos antrais pequenos e médios foram cultivados em meio contendo EGF (10 ng / mL), P4 (100 µM) ou ambos. Durante o cultivo, foram avaliadas a taxa de crescimento, a retomada da meiose e os níveis de RNAm acima citados. Os níveis de RNAm em oócitos de folículos secundários e antrais foram analisados pelo teste de KruskalWallis. O percentual de oócitos em VG foi analisado pelo teste Mann Whitney. Os resultados mostraram que os níveis de RNAm para H1FOO, GDF9, CCNB1 e PARN foram maiores em oócitos de folículos antrais pequenos, médios e grandes do que em oócitos folículos secundários. O cultivo in vitro folículos secundários aumentou significativamente os níveis todos os transcritos estudados. A pré-maturação de oócitos de folículos antrais pequenos aumentou os níveis de RNAm para GDF9, PARN e eIF4E. Além disso, níveis mais altos de cMOS e H1FOO foram identificados em oócitos de folículos antrais médios pré-maturados. Adicionalmente, EGF e P4 influenciaram o crescimento de oócitos submetidos à prématuração in vitro e a expressão de transcritos em oócitos de folículos antrais pequenos e médios. EGF ou P4 também aumentou os níveis de RNAm do cMOS (P<0,05), enquanto que tanto o EGF como a P4 aumentaram os níveis de mRNA para os níveis de H1FOO. Em conclusão, o crescimento folicular está associado a um aumento na expressão de H1FOO, GDF9, CCNB1 e PARN. O cultivo in vitro de folículos secundários, pré-maturação e a maturação dos oócitos dos folículos antrais aumentam a expressão de eIF4E, PARN, H1FOO, cMOS, GDF9 e CCNB1. Além disso, P4 sozinho ou associado ao EGF aumentam a expressão de RNAm para cMOS, CCNB1 e H1FOO.
Abstract: During growth, under the influence of hormones and growth factors, such as Progesterone (P4) and Epidermal Growth Factor (EGF), oocytes synthesize large amounts of mRNA that are accumulated to form a large stock of maternal mRNA, are the growth factor and differentiation 9 (GDF9), a cMOS kinase, a specific poly (a) ribonuclease (PARN), the translation initiation factor (eIF4E), a cyclin B1 (CCNB1) and a history with specific oocyte ligand (H1FOO). Thus, the objectives of this study were: (1) to evaluate the levels of mRNA for eIF4E, PARN, H1FOO, cMOS, GDF9 and CCNB1 in oocytes of secondary and antral follicles at different stages of development and (2) to evaluate the factor factor epidermal growth (EGF) and progesterone (P4) without growth, resuming the mean and levels of levels transcribed in oocytes of small and medium antral follicles after pre-maturation and in vitro maturation. For this purpose, fresh oocytes derived from secondary bovine follicles, as well as small, medium and large antral follicles were collected to analyze the levels of mRNA for transcripts mentioned above. In addition, secondary follicles grown for 18 days or the cumulus oocyte complex (CCO) of antral follicles after growth and pre-maturation were also collected for analysis of mRNA levels. Then, the CCOs derived from small and medium antral follicles were cultured in medium containing EGF (10 ng / mL), P4 (100 µM) or both. During cultivation, growth rates were evaluated, taken from the average and levels of mRNA mentioned above. The levels of mRNA in oocytes from secondary and anal follicles were analyzed by the Kruskal-Wallis test. The percentage of oocytes in the VG was analyzed using the Mann Whitney test. The results showed that mRNA levels for H1FOO, GDF9, CCNB1 and PARN were higher in oocytes of small, medium and large antral follicles than in secondary follicle oocytes. The cultivation of secondary follicles in vitro significantly increased the levels of all studied transcripts. Pre-maturation of oocytes from small antral follicles increased the levels of mRNA for GDF9, PARN and eIF4E. In addition, higher levels of cMOS and H1FOO were identified in oocytes from pre-matured middle antral follicles. Additionally, EGF and P4 influenced the growth of oocytes submitted to in vitro prematuration and the expression of transcripts in oocytes of small and medium antral follicles. EGF or P4 also increased cMOS mRNA levels (P <0.05), while both EGF and P4 increased mRNA levels to H1FOO levels. In conclusion, follicular growth is associated with an increase in the expression of H1FOO, GDF9, CCNB1 and PARN. In vitro culture of secondary follicles, pre-maturation and oocyte maturation of antral follicles increase the expression of eIF4E, PARN, H1FOO, cMOS, GDF9 and CCNB1. In addition, P4 alone or associated with EGF increases mRNA expression for cMOS, CCNB1 and H1FOO
URI: http://www.repositorio.ufc.br/handle/riufc/54178
metadata.dc.type: Tese
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