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Title in Portuguese: Efeito da combinação de amiodarona com fluconazol, in vitro, frente a isolados de C. tropicalis resistentes ao fluconazol : novos olhares para antigos fármacos
Title: Combination effect of amiodarone and fluconazole in vitro against isolates resistant to fluconazole C. tropicalis : new perspectives for old drugs
Author: Silva, Cecília Rocha da
Advisor(s): Nobre Júnior, Hélio Vitoriano
Keywords: Sinergismo Farmacológico
Citometria de Fluxo
Candida tropicalis
Resistência a Medicamentos
Issue Date: 2012
Citation: SILVA, C. R. Efeito da combinação de amiodarona com fluconazol, in vitro, frente a isolados de C. tropicalis resistentes ao fluconazol : novos olhares para antigos fármacos. 2012. 88 f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia Médica) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2012.
Abstract in Portuguese: Candida tropicalis é uma levedura diplóide causadora de infecções superficiais e/ou sistêmicas, as quais podem ser adquiridas de maneira endógena ou exógena e podem acometer diversos órgãos. No Brasil, dentre as espécies de Candida spp., a C.tropicalis é a segunda espécie mais comumente isolada e no Ceará é pouco estudada. Nos dias atuais, temos vivenciado um aumento significativo das infecções fúngicas invasivas. Porém as drogas antifúngicas disponíveis no mercado são restritas a um pequeno número quando comparadas as antibacterianas. Logo, este fato unido ao aumento da frequência de resistência cruzada faz necessária a busca por novas estratégias terapêuticas. A amiodarona (AMD) é usada classicamente para tratar pacientes com arritmia. Trabalhos recentes têm demonstrado uma ampla atividade antifúngica desta droga quando associado ao fluconazol (FLC). No presente estudo induzimos resistência em sete cepas de Candida tropicalis e avaliamos um eventual sinergismo entre FLC e AMD. A avaliação da interação das drogas foi determinada através do cálculo da Fractionary Inhibitory Concentration (FICI) e por meio da técnica de citometria de fluxo, onde também avaliamos o provável mecanismo de ação desse sinergismo. Os isolados utilizados no estudo pertencem ao Laboratório de Bioprospecção Experimental em Leveduras (LABEL) da UFC. Para o cumprimento da metodologia, as cepas foram recuperadas do estoque e identificadas por biologia molecular. A indução foi realizada adaptando-se o protocolo de Pinto e Silva (2009). Os testes de sensibilidade foram realizados utilizando-se o teste de microdiluição em caldo padronizado pelo CLSI, segundo o documento M27-A3. Para avaliar o sinergismo utilizou-se a técnica do checkboard. Por fim, para verificar o possível mecanismo de ação do sinergismo, determinamos a integridade de membrana, potencial transmembrana mitocondrial, formação de espécies reativas de oxigênio (ROS), teste do cometa, análise da oxidação de bases purinas e caspases. As cepas de C.tropicalis após ~100 dias atingiram um CIM > 64µg/mL. Os testes de sensibilidade apresentaram CIM > 64µg/mL tanto para o FLC como para AMD. Das cepas testadas, seis apresentaram sinergismo. O tratamento FLC+AMD alterou a integridade da membrana plasmática e mitocondrial, aumentou os níveis de ROS intracelularmente, causou danos ao DNA e, consequentemente, conduziu morte celular por apoptose.
Abstract: Candida tropicalis is a diploid yeast causing superficial infections and / or systemic, which can be acquired endogenously or exogenously and can affect several organs. In Brazil, among the species of Candida spp. The C.tropicalis is the second most common species isolated in Ceará and is rarely studied. Nowadays, we have experienced a significant increase in invasive fungal infections. But antifungal drugs on the market are restricted to a small number when compared to the antibacterial. Therefore, this fact coupled with the increased frequency of cross-resistance is necessary to search for new therapeutic strategies. Amiodarone (AMD) is traditionally used to treat patients with arrhythmia. Recent studies have shown a broad antifungal activity of this drug when combined with fluconazole (FLC). In the present study we induced resistance in seven strains of Candida tropicalis and evaluate a possible synergism between FLC and AMD. The evaluation of the interaction of the drugs was determined by calculating the Fractionary Inhibitory Concentration (FICI) and by flow cytometry, where we also evaluated the likely mechanism of action of this synergism. The isolates used in this study belong to the Laboratory of Experimental Bioprospecting in yeast (LABEL) the UFC. For the fulfillment of the methodology, the strains were recovered from stock and identified by molecular biology. The induction was carried out adapting the protocol of Pinto and Silva (2009). Sensitivity tests were performed using the broth microdilution test standardized by the CLSI, the document M27-A3. To evaluate the synergism used the technique of checkboard. Finally, to determine the possible mechanism of action of synergism, we determine the membrane integrity, mitochondrial transmembrane potential, formation of reactive oxygen species (ROS), comet assay, analysis of the oxidation of purine bases and caspases. Strains C.tropicalis after ~ 100 days reached an MIC> 64μg/mL. The sensitivity tests were MIC> 64μg/mL both the FLC as AMD. Of the strains tested, six showed synergism. The treatment changed the FLC + AMD plasma membrane integrity and mitochondrial increased levels of intracellular ROS, cause DNA damage and therefore led cell death by apoptosis.
URI: http://www.repositorio.ufc.br/handle/riufc/5520
metadata.dc.type: Dissertação
Appears in Collections:DPML - Dissertações defendidas na UFC

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