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Title in Portuguese: Efeito do imiquimode na cicatrização de queimadura em ratos
Author: Mesquita, Charles Jean Gomes de
Advisor(s): Leite, Jose Alberto Dias
Keywords: Imunomodulação
Cicatrização
Colágeno
Issue Date: 2008
Citation: MESQUITA, Charles Jean Gomes de. Efeitos do imiquimode na cicatrização de queimaduras em ratos. 2008. 109 f. Dissertação (Mestrado em Cirurgia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2008.
Abstract in Portuguese: Queimaduras podem causar substancial morbidade e contraturas devido à hiperproliferação fibroblástica. O imiquimode, imunomodulador utilizado em doenças virais e neoplasias cutâneas, promove resposta imune inata e adaptativa, interagindo com Toll-Like Receptors, permitindo reconhecer antígenos e células invasoras, ativando células de Langerhans e citocinas endógenas capazes de suprimir a hiperproliferação fibroblástica, mostrando-se útil no tratamento de cicatrizes hipertróficas e quelóides. Inexistiam trabalhos sobre o imiquimode em queimaduras cutâneas. Avaliou-se os efeitos do imiquimode na cicatrização de queimaduras utilizando-se métodos macroscópicos, microscópicos e computacionais. Produziram-se queimaduras dérmicas profundas de cada lado da linha média dorsal em 32 ratos Wistar utilizando um ferro-de-solda modificado aplicado a pele por 9s. Instituiram-se tratamentos 3X/semana a partir do segundo dia pós-queimadura (D2PQ). No lado direito (controle) utilizou-se solução salina isotônica (SAL). À esquerda utilizou-se imiquimode (IMQ) tópico 5%. Oito animais foram eutanasiados nos D4, D7, D14 e D21PQ, obtendo-se fotografias digitais e amostras teciduais. Na análise macroscópica utilizou-se escala visual analógica (EVA), escala de exame clínico (EEC) e planimetria digital. Para análises microscópicas utilizaram-se amostras coradas pela hematoxilina-eosina (HE) ou picrosirius-red (PR). Nas amostras HE, sob microscopia ótica, quantificou-se o tipo e a intensidade da reação inflamatória e a involução temporal do dano tecidual pela atribuição de escores. Amostras PR foram analisadas à microscopia de luz polarizada, quantificando-se a densidade do colágeno tipo I e tipo III e razão colágeno I: colágeno III (Razão I:III). Não houve mortes, infecção nem autocanibalismo. Os parâmetros biométricos não evidenciaram efeitos deletérios sobre o estado nutricional. A EVA favoreceu discretamente o grupo SAL (P=0,0491). A EEC não mostrou diferenças significativas. A planimetria digital evidenciou menor velocidade de reparação nas feridas do grupo IMQ (P<0,05). A quantificação da área de lesão mostrou involução similar, exceto no D14PQ onde a área de necrose era maior no grupo IMQ (P<0,05). A análise histológica qualitativa mostrou um processo reparatório mais lentificado no grupo IMQ em todos os tempos. No D7PQ, a intensidade da reação inflamatória foi classificada como discreta em 50% das feridas do grupo SAL e intensa ou moderada em 75% do grupo IMQ (P<0,005). No D21PQ a inflamação foi mais extensa no grupo IMQ (P<0,005). Observou-se que 50% das feridas do grupo SAL exibiam reação inflamatória subaguda e 37,5% crônica, enquanto nenhuma ferida do grupo IMQ mostrava inflamação crônica no D7PQ (P<0,005). No D21PQ a inflamação no grupo IMQ era subaguda (68,75%) e no grupo SAL 56,25% era crônica (P<0,05). A morfometria do colágeno evidenciou aumento do colágeno tipo I e diminuição do colágeno tipo III nos dois grupos. A razão colágeno I: colágeno III foi menor no grupo IMQ em D4 e D21PQ (P<0,05). O modelo reproduziu queimaduras dérmicas, preservando anexos essenciais à reepitelização. A picrossirius-polarização foi eficaz no reconhecimento do colágeno e os métodos computacionais foram eficientes, identificando diferenças mínimas no processo lesão-reparação. O imiquimode foi eficaz em promover o processo inflamatório e retardar a maturação, gerando menor quantidade de fibrose.
Abstract: Burns can result in substantial morbidity because of fibroblastic hyperproliferation and contracture. Imiquimod is a immunomodifier -TLR-7 agonist used in viral diseases and in neoplastic conditions like actinic keratosis, melanoma, and non-melanoma skin cancer. It acts by promoting endogenous cytokines known to suppress fibroblast proliferation. A new recent use is in treating keloids and hypertrophic scars to reduce scarring. No study of the effect of imiquimod on cutaneous burns has been performed. This study examined burn healing in the presence of topical imiquimod by evaluation of wound appearance, computer-aided image analysis, and histology in a rat model. Standardized partial-thickness burns were produced on the dorsum of thirty-two Wistar rats. Right-sided wounds received therapy with isotonic saline (sham). Left-sided wounds were treated with imiquimod cream at 5% (IMQ). This was repeated 3 times/week after injury. Euthanasia was performed at 4th, 7th, 14th and 21st Postburn days (PBD). Wounds were harvested for histological analysis. Evaluation of wound appearance was performed using clinical assessment scale (CAS) and a visual analogue scale (VAS). Scars area and perimeter were measured using digital planimetry to assess wound edge migration by Gilman’s modified Equation. Inflammation type and intensity was graded by histological scale. Collagen type was identified by picrosirius-polarization and morphometric analysis was performed. VAS scores showed discretally improved appearance in the imiquimod-treated wounds versus the saline-treated control at PBD21 (P=0.0491). There was no difference in CAS scores. Wound edge migration was significantly slowest in imiquimod-treated wounds (p<0.05). Histological evidence of partial thickness dermal injury with sparing of dermal appendage epithelial cells was seen in all wounds. Histologic characteristics of gradually diminished injured area between groups were similar except in imiquimod-treated wounds at PBD14 (p<0.05). Inflamattory state was bigger in imiquimod-treated wounds at PBD7 and PBD21 (p<0.005). At PBD7 there was no chronic-type of inflammatory reaction in imiquimod-treated group, although in saline-treated group chronic plus sub-acute type was present in 87.5% (p<0.005). At PBD21 68.75% of imiquimod-treated group showed acute plus subacute inflammatory state, and saline-treated group displayed chronic-type in 56.25% of the wounds. The total amount of collagen increased in both groups throughout all time points. Morphometry showed an inversed ratio type I to type III collagen. Ratios of type I collagen to type III collagen was much lower in imiquimod-treated wounds at PBD4 and PBD21. Topical treatment with Imiquimod 5% cream for partial-thickness burn wounds 3 times/week courses do not improve clinical appearance and scarring during late healing. There is no difference in histology during the short-term healing process. Computer-aided image proccessing was efficient to evaluate burned-wound healing. Wound healing and fibrosis was impaired in imiquimod- treated wound group.
URI: http://www.repositorio.ufc.br/handle/riufc/7296
metadata.dc.type: Dissertação
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