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Title in Portuguese: Veneno da serpente Bothrops jararacussu induz uma resposta inflamatória local dependente de protanóides e da migração de neutrófilos
Author: Wanderley, Carlos Wagner de Souza
Advisor(s): Lima Júnior , Roberto César Pereira
Keywords: Edema
Venenos
Neutrófilos
Issue Date: 2014
Citation: WANDERLEY, C. W. de S. Veneno da serpente Bothrops jararacussu induz uma resposta inflamatória local dependente de protanóides e da migração de neutrófilos. 2014. 93 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2014.
Abstract in Portuguese: Os efeitos locais provocados por venenos botrópicos são caracterizados por edema, hemorragia e dor local. No entanto, os mecanismos fisiopatológicos relacionados a esses venenos podem variar de acordo com a espécie. Esta característica espécie-específica pode prejudicar a eficácia da soroterapia. Desta forma, considerando a diversidade da resposta fisiopatológica dos venenos, investigamos os mecanismos e mediadores envolvidos na resposta inflamatória local induzida pelo veneno da Bothrops jararacussu (VBjsu). Camundongos Swiss fêmeas foram submetidos à injeção intraplantar de solução salina ou VBjsu (0,125-8 µg/pata). Para o estudo dos mecanismos e mediadores envolvidos, diferentes sub-grupos de animais foram submetidas ao pré-tratamento com loratadina (um antagonista do receptor H1), composto 48/80 (para induzir a depleção dos mastócitos), capsaicina (para promover a dessensibilização das fibras C), infliximabe (um anticorpo anti-TNF-α), indometacina (um inibidor não-específico da COX), celecoxibe (um inibidor seletivo da COX-2) ou fucoidina (um modulador de P- e L-selectinas) administrados antes do VBjsu. O edema da pata foi medido por pletismografia. Além disso, os tecidos da pata foram recolhidos para determinação da atividade da mieloperoxidase (MPO), dosagem dos níveis de TNF-α, IL-1 e da imunoexpressão da COX-2. O efeito quimiotático direto do VBjsu também foi estudado por meio do ensaio da câmara de Boyden, e o estado de ativação dos neutrófilos humanos foi avaliado através da dinâmica intracelular de cálcio em neutrófilos realizado in vitro com auxilio da microscopia confocal. O VBjsu causou uma resposta edematogênica concentração e tempo dependentes com aumento da produção local de TNF-α, IL-1β e da imunoexpressão da COX-2 nos tecidos quando comparado ao grupo salina (P<0,05). Ambos, edema e migração de neutrófilos foram impedidos pelos inibidores da COX (indometacina ou celecoxibe), ou pelo modulador de P - e L-selectinas (fucoidina) vs. VBjsu (P<0,05). O exame histopatológico revelou que o VBjsu induz uma precoce migração de neutrófilos para o local da lesão vs. o grupo salina (P<0,05). Além disso, o VBjsu induz a quimiotaxia e ativa neutrófilos in vitro aumentando diretamente a dinâmica de cálcio intracelular quando comparado ao RPMI (P<0,05). Portanto, o VBjsu induz uma resposta edematogênica precoce dependente da produção de prostanoides e da migração de neutrófilos.
Abstract: Local tissue reactions provoked by Bothrops venoms are characterized by edema, hemorrhage, pain, and inflammation; however, the mechanisms of tissue damage vary depending upon the species of snake. This mechanistic variability reduces the efficacy of antivenom treatment. Considering the diversity of intraspecific pathophysiological responses, we investigated the mechanisms and mediators involved in the local inflammatory response induced by the Bothrops jararacussu venom (VBjsu). Female Swiss mice were injected with either saline or VBjsu (0.125-8 µg/paw). In a subset of VBjsu-treated mice, loratadine (an H1 receptor antagonist), compound 48/80 (for mast cell depletion), capsaicin (for C-fiber desensitization), infliximab (an anti-TNF-α antibody), indomethacin (a non-specific COX inhibitor), celecoxib (a selective COX-2 inhibitor) or fucoidan (a P- and L-selectins modulator) were administered before VBjsu treatment. Paw edema was measured by plethysmography. In addition, paw tissues were collected for the measurement of myeloperoxidase (MPO) activity, TNF-α and IL-1 levels, and COX-2 immunoexpression. The direct chemotactic effect of VBjsu was also studied using a Boyden chamber assay, and the in vitro calcium dynamic in neutrophils was investigated using confocal microscopy. VBjsu caused concentration- and time-dependent edematogenic responses and increased the local production of TNF-α and IL-1β as well as COX-2 expression vs. saline group (P<0.05). Both edema and neutrophil migration were prevented by pretreatment with cyclooxygenase inhibitors (indomethacin or celecoxib) or by the P- and L-selectins modulator, fucoidan vs. VBjsu (P<0.05). Furthermore, VBjsu induced a direct in vitro neutrophil chemotaxis by increasing intracellular calcium vs. RPMI (P<0.05). Therefore, VBjsu induces an early onset edema dependent upon prostanoid production and neutrophil migration.
URI: http://www.repositorio.ufc.br/handle/riufc/8913
metadata.dc.type: Dissertação
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